基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) galdcm met(DE3)

簡(jiǎn)要說(shuō)明

B834 是 BL21 菌株的父系菌株。該系列宿主菌是蛋氨酸缺陷型，可以用來(lái)高水平，高特異性的使用35S-蛋氨酸和硒代蛋氨酸標(biāo)記目的蛋白，進(jìn)行蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)研究。B834宿主菌也是 lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型菌株。DE3 是溶源性的λDE3, 所以帶有T7RNA 聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于 pET 系列載體，及其他T7 啟動(dòng)子系列載體。

操作說(shuō)明

1、取 100μl 冰上融化的B834（DE3）感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25 分鐘。

2. 42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入 700μl 不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后 37℃，200rpm 復(fù)蘇60 分鐘。

4. 5000rpm 離心一分鐘收菌，留取100μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG 濃度可選（0.1-40mM 均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。