JM109 Chemically Compete Cell

基因型：

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqIqZΔM15

簡要說明：

JM109菌株來源于E.coli K strain，是提取高質量DNA的理想菌株，recA1 和 endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質粒 DNA 的提取。攜帶 hsdR17基因型背景，使得異源DNA不被內(nèi)源核酸酶系統(tǒng)降解。laqI qZΔM15的存在使JM109可用于構建克隆，藍白斑篩選實驗；High5TM系列JM109感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質粒檢測轉化效率可達1×109cfu/μg。

操作說明：

1.JM109感受態(tài)細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA（質?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項：

1.感受態(tài)細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內(nèi)加入質粒，否則會影響轉化效率。

2.混入質?；蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少最終用于涂板的菌量。